Evaluación del estado de metilación en estudios pre-clínicos humanos y estudios in vitro

 

 

El estudio clínico piloto en humanos se lleva a cabo con voluntarios sanos comprendidos entre 18 y 30 años. Tras la extracción de sangre y aislamiento de ADN genómico, se realiza una conversión con bisulfito y una PCR metilación específica cuantitativa (qMSP) utilizando amplias regiones genómicas repetitivas.

 

Una vez obtenidos los resultados de cada ciclo de unión (CT) de cada qMSP, los datos son normalizados con el housekeeping Alu C4 usando el método de comparación de CT de Nikolaidis et al., (2012) y Liloglou et al., (2012):

 

• CT del gen diana fue normalizado con respecto al gen referencia (ΔCT).

• ΔCT de cada muestra ensayada o referencia (ΔCT,r) fue comparada con el ΔCT de la muestra control (ΔCT,cb): ΔΔCT.

• El valor relativo de cada muestra es definido por la fórmula:                                                                                                     2 - (ΔCT,r - ΔCT,cb) = 2 - ΔΔCT